產品名稱
豬主動脈瓣膜間質細胞
產品規格
5×105cells/T25細胞培養瓶
組織來源
主動脈組織
生長特性
貼壁培養
細胞形態
長梭形
分類
豬原代細胞
貨號
A01X2259
用途
僅供科研實驗
細胞特性：
1）組織來源于實驗動物的正常主動脈組織。
2）細胞鑒定：平滑肌肌動蛋白（α-SMA）或波形蛋白（Vimentin）熒光染色為陽性。
3）經鑒定細胞純度高于90%。
4）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5）細胞生長方式：長梭形、不規則細胞，貼壁培養。
推薦培養基
我們推薦使用 DELF 原代 間質 細胞培養體系 作為體外培養的培養基。
細胞簡介：
主動脈瓣施半月瓣，位于左心室和主動脈之間，抑制射入主動脈的血液回流入左心室。主動脈瓣鈣化可引起主動脈瓣狹窄關閉不全等，施導致老年退行性心瓣膜病的重要病理改變，其發病率隨著年齡的增加而升高。有研究表明，瓣膜間質細胞向城固細胞樣細胞表型轉化有可能是主動脈瓣膜鈣化的病理改變基礎之一。
①動物處理：用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡，然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒（浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內，影響培養）后迅速置于的培養皿中，帶入超凈工作臺內進行無菌操作取材。
②取材：將乳鼠俯臥位，用乙醇進行一次背部，再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側的皮膚，剖開腹部，取出肝臟放入另一培養皿中，除去其他連帶組織，用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次，每次1~2 ml，洗去血污，將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離：用眼科剪和鑷子將肝門區所附的血管結締組織盡可能去除，然后將肝組織反復剪碎，直至剪成0.5~1 mm3的小塊后，加入PBS 1~2ml，另取1只吸管前端反復吹打清洗組織塊兒3次，棄廢液。
④接種：用吸管加2滴小牛血清，小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液，然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地（組織塊之間相距約0.5 cm左右）排種在培養瓶底壁上; 每個25ml的培養瓶中可接種20塊左右。
⑤培養：將培養瓶慢慢翻轉，使瓶底向上，加入1~2 ml培養液，擰緊瓶蓋，做好標記，置 37 ℃恒溫箱中培養1~2小時，待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后，再緩慢翻轉培養瓶（盡量注意不要使組織塊漂浮起來），另加入培養液2 ml左右使其能覆蓋組織塊，將瓶蓋調整在略微松弛狀態，繼續置37 ℃恒溫箱靜放培養。
⑥觀察：細胞接種后一般幾個小時內即可貼壁，并開始生長。如果無污染且細胞生長良好，可見培養液顏色由原來的橘紅色變成黃色，此時可補加或更換培養液。10~15天后可長成致密單層細胞，這時可進行傳代培養。
原代細胞步驟：
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織，剔除包膜及壞死組織，無菌PBS清洗3-5次；切成約1mm3組織塊；
2. 加入2mmol 的 EDTA，搖勻后放置冰上約 30-60min；
3. 離心，并加入膠原酶消化（含蛋白酶）；
4. 消化期間，置于37°培養箱。每15min搖晃一次，消化時間根據腫瘤組織來定，約1-2h；
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時，用 40μm 的細胞濾網過濾細胞，收集；
6. 用培養基重懸，置于培養箱培養。
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