實(shí)驗方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡便、快速，但對組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
細(xì)胞簡介：
成纖維細(xì)胞是肺間質(zhì)中含量豐富的細(xì)胞種類。這些成纖維細(xì)胞與普通的相似，但也有其的特征，例如具有很長的偽足和細(xì)胞間的間隙連接。
肺成纖維細(xì)胞的主要功能為分泌肺泡隔基質(zhì)中的 III型膠原，彈性蛋白以及蛋白多糖，也在肺部受損時擔(dān)任重要的修復(fù)和重建功能。肺部受傷后，在炎癥部位的一定程度的成纖維細(xì)胞積聚是肺部復(fù)原的關(guān)鍵步驟，過多或者不足的成纖維細(xì)胞聚集都會導(dǎo)致肺功能異常。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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肺組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X2254 |
僅供科研研究實(shí)驗 |
細(xì)胞特性：
1）組織來源于實(shí)驗動物的正常肺組織。
2)細(xì)胞鑒定：纖維連接蛋白（Fibronectin）熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細(xì)胞生長方式：長梭狀細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
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FOXP3ELISAkit
胰島素樣生長因子酸不穩(wěn)定亞基ALS抗體
IGFALS
牛病毒性腹瀉病毒1型E2蛋白抗體
BVDV E2
Tafazzin蛋白抗體 Anti-Tafazzin
受體活性修飾蛋白3抗體 Anti-RAMP3
腦特異性蛋白BPX抗體 Anti-NAP1L2
信號通路WNT8A抗體 Anti-Wnt8A
MFSD10蛋白抗體
MFSD10
唐氏綜合癥細(xì)胞粘附分子2抗體
DSCAML1
轉(zhuǎn)錄延伸因子B2抗體 Anti-Elongin B/TCEB2
神經(jīng)元突觸膜胞外分泌調(diào)節(jié)蛋白3抗體 Anti-RIMS3
磷酸化2型神經(jīng)纖維瘤抗體 Anti-Phospho-NF2(Ser518)
內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素抗體（N端） Anti-PBEF(NT)
TRAFD1蛋白抗體
TRAFD1
線粒體核糖體蛋白L52抗體
MRPL52
P物質(zhì)受體抗體 Anti-Substance P Receptor/NK1R
嗅球蛋白3抗體 Anti-OLFM3/Optimedin
原鈣粘蛋白16抗體 Anti-PCDHB16
腫瘤壞死因子誘導(dǎo)蛋白8樣蛋白2/TNFα-IP 8L2抗體 Anti-TNFAIP8L2/TIPE2
羅丹明標(biāo)記兔IgG（型對照)
豬肺成纖維細(xì)胞Mouse Anti-Rabbit IgG H&L / Cy7
FERDL3蛋白抗體
ankyrin repeat and MYND domain containing 1; Testis specific ankyrin like protein 1; TSAL1; Zinc finger MYND domain containing protein 13; ZMYND13; ANKY1_HUMAN.
豬肺成纖維細(xì)胞
大鼠肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞
NB16人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞
人胰腺導(dǎo)管腺癌細(xì)胞；PL45 (STR)
實(shí)驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時間根據(jù)正常細(xì)胞消化時間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細(xì)胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。