產品名稱
兔中耳上皮細胞
產品規格
5×105cells/T25細胞培養瓶
組織來源
中耳組織
生長特性
貼壁培養
細胞形態
上皮樣細胞
分類
兔原代細胞
貨號
A01X2167
用途
僅供科研實驗
細胞特性：
1）細胞來源于實驗動物的正常中耳組織。
2)細胞鑒定：廣譜角蛋白((Pan Cytokeratin)熒光染色為陽性。
3)經鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細胞生長方式：上皮樣細胞，貼壁培養。
推薦培養基
我們推薦使用 DELF 原代上皮細胞培養體系 作為體外培養的培養基。
細胞簡介：
中耳位于外耳和內耳之間，主要結構是鼓膜和聽骨鏈。中耳內部不規則中空的結構表面覆蓋著一層上皮組織，起到物理保護的作用。
①動物處理：用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡，然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒（浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內，影響培養）后迅速置于的培養皿中，帶入超凈工作臺內進行無菌操作取材。
②取材：將乳鼠俯臥位，用乙醇進行一次背部，再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側的皮膚，剖開腹部，取出肝臟放入另一培養皿中，除去其他連帶組織，用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次，每次1~2 ml，洗去血污，將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離：用眼科剪和鑷子將肝門區所附的血管結締組織盡可能去除，然后將肝組織反復剪碎，直至剪成0.5~1 mm3的小塊后，加入PBS 1~2ml，另取1只吸管前端反復吹打清洗組織塊兒3次，棄廢液。
④接種：用吸管加2滴小牛血清，小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液，然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地（組織塊之間相距約0.5 cm左右）排種在培養瓶底壁上; 每個25ml的培養瓶中可接種20塊左右。
⑤培養：將培養瓶慢慢翻轉，使瓶底向上，加入1~2 ml培養液，擰緊瓶蓋，做好標記，置 37 ℃恒溫箱中培養1~2小時，待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后，再緩慢翻轉培養瓶（盡量注意不要使組織塊漂浮起來），另加入培養液2 ml左右使其能覆蓋組織塊，將瓶蓋調整在略微松弛狀態，繼續置37 ℃恒溫箱靜放培養。
⑥觀察：細胞接種后一般幾個小時內即可貼壁，并開始生長。如果無污染且細胞生長良好，可見培養液顏色由原來的橘紅色變成黃色，此時可補加或更換培養液。10~15天后可長成致密單層細胞，這時可進行傳代培養。
原代細胞步驟：
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織，剔除包膜及壞死組織，無菌PBS清洗3-5次；切成約1mm3組織塊；
2. 加入2mmol 的 EDTA，搖勻后放置冰上約 30-60min；
3. 離心，并加入膠原酶消化（含蛋白酶）；
4. 消化期間，置于37°培養箱。每15min搖晃一次，消化時間根據腫瘤組織來定，約1-2h；
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時，用 40μm 的細胞濾網過濾細胞，收集；
6. 用培養基重懸，置于培養箱培養。
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