實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
胰腺分為外分泌腺和腺兩部分。其中，外分泌腺由腺泡和腺管組成，腺泡分泌胰液，腺管是胰液排出的通道。腺泡主要由腺泡細胞構(gòu)成，與閏管相連，外有基膜，為典型的蛋白質(zhì)分泌細胞。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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胰腺組織 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X2110 |
僅供科研研究實驗 |
細胞特性：
1）組織來源于實驗動物的正常胰腺組織。
2)細胞鑒定：亞甲藍染色。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細胞生長方式：呈葡萄樣聚集，多數(shù)懸浮，單個腺泡呈球形。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 DELF 原代上皮細胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠熱休克蛋白27(HSP-27)elisa檢測試劑盒
大鼠白介素4（IL－4）elisa檢測試劑盒
小鼠鞘磷脂(SPH)elisa檢測試劑盒
人E3泛素蛋白連接酶TRIM68(TRIM68)elisa檢測試劑盒
組織ERK1/2激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
組織結(jié)構(gòu)型神經(jīng)元一氧化氮合成酶（cNOS/NOS1/nNOS）活性熒光定量檢測試劑盒
人補體1抑制物抗體-IgM(C1INH-IgM)elisa分析檢測試劑盒
大鼠促生長釋放(GHRH)elisa檢測試劑盒
小鼠載脂蛋白B（Apo B）elisa檢測試劑盒
FITC標記人CD42b單克隆抗體 human CD42b/FITC
FMS樣激酶3配體抗體 FLT3L
硫氧還蛋白相關跨膜蛋白2抗體 TMX2
球蛋白超家族成員12抗體 IGSF12
低密度脂蛋白受體重組兔單克隆抗體 LDLR
短鏈脫氫酶/還原酶家族9抗體 DHRS9
雄烷受體CAR抗體 Constitutive androstane receptor
血管生成素受體1抗體 TIE1
ras基因相關蛋白RAB37抗體 RAB37
RREB1蛋白抗體 RREB1
死亡相關蛋白3抗體 DAP3
協(xié)轉(zhuǎn)運蛋白4-A5抗體 SLC4A5
急性髓細胞白血病1蛋白1/2抗體 RUNX1 + RUNX2
鉀離子通道蛋白12抗體 KCNK12
1號染色體開放閱讀框67抗體 C1orf67
5脂氧合酶激活蛋白抗體 ALOX5AP
冰凍切片制片預處理固著液
兔胰腺腺泡上皮細胞DHR-ROS活性氧檢測試劑盒200T
過氧化物酶（POD）試劑盒
2-dihydrobenzene-1; 2-diol dehydrogenase; 3 alpha HSD3; 3 alpha hydroxysteroid dehydrogenase type III; 3-alpha-HSD3; AK1C2_HUMAN; AKR1C pseudo; AKR1C2; Aldo keto reductase family 1 member C2; Aldo-keto reductase family 1 member C2; BABP; Bile acid binding protein; Chlordecone reductase homolog; Chlordecone reductase homolog HAKRD; DD; DD-2; DD/BABP; DD2; DDH 2; DDH2; Dihydrodiol dehydrogenase 2; Dihydrodiol dehydrogenase/bile acid binding protein; Dihydrodiol dehydrogenase/bile acid-binding protein; HAKRD; HBAB; MCDR 2; MCDR2; Pseudo chlordecone reductase; Trans 1 2 dihydrobenzene 1 2 diol dehydrogenase; Trans-1; Type II dihydrodiol dehydrogenase; Type III 3 alpha hydroxysteroid dehydrogenase; Type III 3-alpha-hydroxysteroid dehydrogenase.
兔胰腺腺泡上皮細胞
大鼠胃黏膜上皮細胞
Neuro-2a 小鼠腦神經(jīng)瘤細胞
TU212人喉癌細胞
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術等。