細胞簡介：
人Ⅱ型肺泡上皮細胞分離自肺組織；肺泡由單層上皮細胞構成的半球狀囊泡。肺中的支氣管經多次反復分枝成無數細支氣管，它們的末端膨大成囊，囊的四周有很多突出的小囊泡，即為肺泡。小肺泡細胞，又稱I型肺泡細胞，厚約0.1微米，基底部是基底膜，無增殖能力。大肺泡細胞，又稱Ⅱ型肺泡細胞，分泌表面活性物質(二棕櫚酰卵磷脂)，以降低肺泡表面張力。Ⅱ型肺泡細胞位于Ⅰ型肺泡細胞之間，數量較Ⅰ型肺泡細胞多，但覆蓋面積比Ⅰ型肺泡細胞小。細胞立方形或圓形,頂端突入肺泡腔。細胞核圓形，胞質著色淺、呈泡沫狀。電鏡下，細胞游離而有少量微絨毛，胞質內富含線粒體和溶酶體，有較發達的粗面內質網和高爾基復合體。核上方有較多的分泌顆粒，電子密度高、大小不等，直徑約0.1-1.0μm顆粒內含有平行排列的板層狀結構，稱為嗜餓性板層小體。小體內的主要成分為磷脂，以二棕櫚酰卵磷脂為主，此外還有糖胺多糖及蛋白質等。顆粒內物質釋放出來后，在肺泡表面形成一層粘液層，稱為表面活性物質(surfactant)。表面活性物質有降低肺泡表面張力、穩定肺泡大小的作用。呼氣時肺泡縮小，表面活性物質密度增加，表面張力降低，防止肺泡過度塌陷；吸氣時肺泡擴張，表面活性物質密度減小，肺泡回縮力加大，可防止肺泡過度膨脹。表面活性物質的缺乏或變性均可引起肺不張，過度通氣可造成表面活性物質缺乏；吸入毒氣可直接破壞表面活性物質。Ⅱ型肺泡細胞有分裂、增殖并分化為Ⅰ型肺泡細胞的潛能，故具有修復受損傷上皮的作用。
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組織來源 |
產品規格 |
貨號 | 用途 |
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肺組織 |
5×105cells/T25細胞培養瓶 |
A01X1254 |
僅供科研研究實驗 |
培養信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態 上皮細胞樣
傳代特性 可傳1-2代左右
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介：
質量檢測：
實驗室分離的人Ⅱ型肺泡上皮細胞經SP-C熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、酵母等。
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養基（含有1X雙抗）洗滌一次。經過的心臟破碎組織塊經過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養皿正置3-5小時，然后更換培養皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養皿在4℃正置過夜）；
（7）培養基培養：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養基，然后在恒溫潮濕細胞培養箱（37℃，5% CO2）培養48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據細胞數量種植到對應的培養皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術等。公司正在出售的產品：
| 羥脯氨酸糖蛋白(HRGP)ELISA試劑盒 | B細胞遷移基因4抗體 |
| 羥脯氨酸(Hyp)ELISA試劑盒 | 細胞色素P450 F2抗體 |
| 羥賴氨酸糖苷(HOLG)ELISA試劑盒 | 有絲分裂蛋白BUB3重組兔單克隆抗體 |
| 羥賴氨酸(Hyl)ELISA試劑盒 | 細胞色素P450 4V2抗體 |
| 羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶(HMG-CoAR)ELISA試劑盒 | BXDC1蛋白抗體 |
| 羥甲基戊二酸單酰輔酶A(HMG-CoA)ELISA試劑盒 | 細胞色素P450 4X1抗體 |
| 羥基賴正己氨酸(HLNL)ELISA試劑盒 | 10號染色體開放閱讀框140抗體 |
| 羥基膠原吡啶交聯(OH-PYD)ELISA試劑盒 | 細胞色素P450 IVF8抗體 |
| 強啡肽(Dyn)ELISA試劑盒 | 10號染色體開放閱讀框30抗體 |
| 潛伏膜蛋白1(LMP-1)ELISA試劑盒 | 細胞因子樣蛋白1抗體 |
| 前心鈉肽(Pro-ANP)ELISA試劑盒 | CULLIN抗體 |
| 前鐵調素(Pro-Hepc)ELISA試劑盒 | 細胞色素P450 26B抗體 |
| 前列腺特異性抗原(PSA)ELISA試劑盒 | 10號染色體開放閱讀框63抗體 |
| 前列腺素H2(PGH2)ELISA試劑盒 | 細胞色素P450 2C11抗體 |
| 前列腺素F2α(PGF2α)ELISA試劑盒 | 11號染色體開放閱讀框65抗體 |
| 前列腺素F(PGF)ELISA試劑盒 | 細胞色素P450 2D10抗體 |
| 前列腺素E2(PGE2)ELISA試劑盒 | 11號染色體開放閱讀框67抗體 |
| 前列腺素E1(PGE1)ELISA試劑盒 | 人II型肺泡上皮細胞細胞色素P450 3A5抗體 |
| 前列腺素D2(PGD2)ELISA試劑盒 | 11號染色體開放閱讀框71抗體 |
| 前列腺素A1(PGA1)ELISA試劑盒 | 細胞角蛋白15重組兔單克隆抗體 |
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養后，細胞容易貼壁生長。