產品名稱：視網膜mulller細胞

產品規格：5×105

貨號：BH-X019923

產品類型：原代細胞

單位：T25/瓶

提供細胞鑒定：提供**熒光鑒定報告

保存培養溫度（℃）：37

運輸溫度（℃）：常溫

培養操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）； 

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時； 

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片完全浸在培養液中； 

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及細胞化學檢測。 

公司細胞廣泛用于國內院校的細胞生物學研究，作為實驗項目研究。

實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法； 

2．所使用的蓋玻片應該為玻璃**，并經過鉻酸洗液處理； 

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 

4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率； 

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

細胞培養方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

細胞處理方法：

以下細胞處理方法及細胞說明書僅供參考，具體操作還需要根據到貨時細胞密度，細胞生長狀態等具體情況，酌情處理，如需要更詳細技術指導，請及時電話或郵件聯系。

一．貼壁細胞

客戶接收到細胞，用75%的酒精（建議配制75%酒精的水是過的）培養瓶外部。

肉眼觀察細胞培養基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張）。

顯微鏡觀察細胞，當細胞融匯至80%左右（可以傳代的情況下），細胞應該在37度培養箱預溫1-2h后再做處理。如未達到細胞傳代密度，培養瓶應預留一部分培養基繼續培養。

嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶。

將細胞培養瓶內的培養基用吸管完全吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養基培養細胞）。

用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細胞,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。

1000rpm,5min離心，重懸細胞。換新的細胞培養瓶，37℃,5%CO2  培養。

二．懸浮細胞

1. 接收到細胞，用75%的酒精（建議配制75%酒精的水是過的）培養瓶外部。

2. 肉眼觀察細胞培養基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張）。

3. 嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶。

4. 將細胞培養瓶內的培養基用吸管完全吸出（嚴禁直接傾倒）。

5. 1000rpm,5min離心，重懸細胞。 換新的細胞培養瓶和新鮮培養基，37℃,5%CO2  培養。

乳酸桿瓊脂培養基    250(g)

濾膜腸球瓊脂    250(g)

Preston 選擇性添加物    4支/盒

M肉湯    250(g)

霍亂雙糖鐵瓊脂    250(g)

HC瓊脂基礎    250

沙氏BHI瓊脂    250(g)

視網膜mulller細胞腦腸肽(Ghrelin)elisa檢測試劑盒英文名稱：Ghrelin ELISA Kit，英文縮寫：Ghrelin，產品別名：腦腸肽(Ghrelin)ELISA檢測試劑盒，腦腸肽(Ghrelin)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

磷脂轉移蛋白β(PITPNB)elisa檢測試劑盒英文名稱：PITPNB ELISA Kit，英文縮寫：PITPNB，產品別名：磷脂轉移蛋白β(PITPNB)ELISA檢測試劑盒，磷脂轉移蛋白β(PITPNB)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

球蛋白D(IgD)elisa檢測試劑盒英文名稱：IgD ELISA Kit，英文縮寫：IgD，產品別名：球蛋白D(IgD)ELISA檢測試劑盒，球蛋白D(IgD)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

粒巨噬集落刺激因子(GM-CSF)elisa檢測試劑盒英文名稱：GM-CSF ELISA Kit，英文縮寫：GM-CSF，產品別名：粒巨噬集落刺激因子(GM-CSF)ELISA檢測試劑盒，粒巨噬集落刺激因子(GM-CSF)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

可溶性血管內皮蛋白C受體(sEPCR)elisa檢測試劑盒英文名稱：sEPCR ELISA Kit，英文縮寫：sEPCR，產品別名：可溶性血管內皮蛋白C受體(sEPCR)ELISA檢測試劑盒，可溶性血管內皮蛋白C受體(sEPCR)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

人抗組蛋白抗體(AHA)elisa檢測試劑盒英文名稱：AHA ELISA Kit，英文縮寫：AHA，產品別名：人抗組蛋白抗體(AHA)ELISA檢測試劑盒，人抗組蛋白抗體(AHA)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

人抗髓磷脂抗體IgA(AMA IgA)elisa檢測試劑盒英文名稱：AMA IgA ELISA Kit，英文縮寫：AMA IgA，產品別名：人抗髓磷脂抗體IgA(AMA IgA)ELISA檢測試劑盒，人抗髓磷脂抗體IgA(AMA IgA)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

人抗肽(Att)elisa檢測試劑盒英文名稱：Att ELISA Kit，英文縮寫：Att，產品別名：人抗肽(Att)ELISA檢測試劑盒，人抗肽(Att)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

人抗促甲狀腺素受體抗體(TRAb)elisa檢測試劑盒英文名稱：TRAb ELISA Kit，英文縮寫：TRAb，產品別名：人抗促甲狀腺素受體抗體(TRAb)ELISA檢測試劑盒，人抗促甲狀腺素受體抗體(TRAb)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

精氨酰-tRNA合成酶(RARS)elisa檢測試劑盒英文名稱：RARS ELISA Kit，英文縮寫：RARS，產品別名：精氨酰-tRNA合成酶(RARS)ELISA檢測試劑盒，精氨酰-tRNA合成酶(RARS)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

降解加速因子(DAF)elisa檢測試劑盒英文名稱：DAF ELISA Kit，英文縮寫：DAF，產品別名：降解加速因子(DAF)ELISA檢測試劑盒，降解加速因子(DAF)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。