
細胞培養方法:
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中,T25培養瓶加6-8ml培養基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養基吹勻,將細胞懸液加入培養瓶中,補加適量培養基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
公司細胞廣泛用于國內院校的細胞生物學研究,作為實驗項目研究。
產品名稱 |
兔下丘腦神經元細胞 |
規格 | 詳見說明書 |
貨號 |
FS-016527
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培養操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片完全浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及細胞化學檢測。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為玻璃**,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
細胞處理方法:
產品名稱以下細胞處理方法及細胞說明書僅供參考,具體操作還需要根據到貨時細胞密度,細胞生長狀態等具體情況,酌情處理,如需要更詳細技術指導,請及時電話或郵件聯系。
一.貼壁細胞
客戶接收到細胞,用75%的酒精(建議配制75%酒精的水是過的)培養瓶外部。
肉眼觀察細胞培養基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張)。
顯微鏡觀察細胞,當細胞融匯至80%左右(可以傳代的情況下),細胞應該在37度培養箱預溫1-2h后再做處理。如未達到細胞傳代密度,培養瓶應預留一部分培養基繼續培養。
嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。
將細胞培養瓶內的培養基用吸管完全吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養基培養細胞)。
用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細胞,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
1000rpm,5min離心,重懸細胞。換新的細胞培養瓶,37℃,5%CO2 培養。
二.懸浮細胞
1. 接收到細胞,用75%的酒精(建議配制75%酒精的水是過的)培養瓶外部。
2. 肉眼觀察細胞培養基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張)。
3. 嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。
4. 將細胞培養瓶內的培養基用吸管完全吸出(嚴禁直接傾倒)。
5. 1000rpm,5min離心,重懸細胞。 換新的細胞培養瓶和新鮮培養基,37℃,5%CO2 培養。
Nutrient agar No.2,1/100
pCPP-3(pCPP3)
小鼠GATA結合蛋白4(GATA4)ELISA Kit
HRP標記的抗生物素抗體
pQE-30 Xa(pQ30Xa)
Goodburn-Marmion支原休染色試劑盒
大鼠水通道蛋白2(AQP-2) ELISA Kit
Halomonas subglaciescola (artifical organic lake medium)
pCMV-Tag 3A(pCMVTag3A)(60908-2300)
兔一氧化氮合成酶(NOS)ELISA Kit
動物DNA提取
pMSCV-TAP(pMSCVTAP)
Solcia蘇木精染色液
白術內酯III;蒼術內酯III 英文名稱:Atractylenolide III; Atractylodes lactone III 規格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
白花前胡甲素 英文名稱:White Qian Hu Jiasu 規格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
白花前胡乙素 英文名稱:White Qian Hu Yisu 規格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
兔下丘腦神經元細胞白花前胡丙素 英文名稱:White Qian Hu Bingsu 規格::HPLC≥98% 10mg/支 保存::-20℃,避光
白花前胡丁素 英文名稱:White Qian Hu Dingsu 規格::HPLC≥98% 10mg/支 保存::-20℃,避光
白花前胡素E 英文名稱:Praeruptorin E 規格::HPLC≥98% 10mg/支 保存::-20℃,避光
土荊皮、土槿皮 英文名稱:Pseudolaric acid, Pseudolaric acid 規格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
土槿皮;土荊皮;土荊 英文名稱:Pseudolaric acid B; cortex Pseudolaricis acetic acid; Tu Jing acetic acid 規格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
紫菀酮 英文名稱:Shionone 規格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
千層紙素A;木蝴蝶素 英文名稱:Oroxylin A; oroxylin 規格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
鵝去氧膽酸 英文名稱:Chenodeoxycholic acid 規格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光