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熒光定量PCR熔解曲線解讀
日期：2025-04-18 14:12
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摘要：
熔解曲線的解讀：
一般來說，根據(jù)引物設(shè)計原則，熒光定量PCR擴(kuò)增產(chǎn)物長度在80~200 bp之間，對應(yīng)的熔解溫度在80~90℃之間。
在陰性對照沒有擴(kuò)增的情況下，可以根據(jù)熔解曲線驗(yàn)證擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性：
1、熔解曲線在80~90℃之間出現(xiàn)唯1單峰，表明PCR產(chǎn)物特異性好。
2、熔解曲線出現(xiàn)雙峰，在80~90℃之間出現(xiàn)主峰，80℃以下（一般為60~75℃之間）出現(xiàn)雜峰，基本考慮產(chǎn)物中可能存在引物二聚體，可嘗試提高退火溫度、降低引物濃度、重新設(shè)計引物等方法解決。
3、熔解曲線出現(xiàn)雙峰，在80...
熔解曲線的解讀：
一般來說，根據(jù)引物設(shè)計原則，熒光定量PCR擴(kuò)增產(chǎn)物長度在80~200 bp之間，對應(yīng)的熔解溫度在80~90℃之間。
在陰性對照沒有擴(kuò)增的情況下，可以根據(jù)熔解曲線驗(yàn)證擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性：
1、熔解曲線在80~90℃之間出現(xiàn)唯1單峰，表明PCR產(chǎn)物特異性好。
2、熔解曲線出現(xiàn)雙峰，在80~90℃之間出現(xiàn)主峰，80℃以下（一般為60~75℃之間）出現(xiàn)雜峰，基本考慮產(chǎn)物中可能存在引物二聚體，可嘗試提高退火溫度、降低引物濃度、重新設(shè)計引物等方法解決。
3、熔解曲線出現(xiàn)雙峰，在80~90℃之間出現(xiàn)主峰，90℃以上又出現(xiàn)雜峰，基本考慮有非特異性擴(kuò)增。若模板中有基因組DNA污染導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增，可通過跨內(nèi)含子設(shè)計引物或去除基因組DNA等方法解決。