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PCR 出現(xiàn)無擴(kuò)增條帶問題原因及對策
日期：2025-04-18 14:49
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摘要：PCR 出現(xiàn)無擴(kuò)增條帶問題原因及對策
PCR 出現(xiàn)無擴(kuò)增條帶問題原因及對策：
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1、酶失活或在反應(yīng)體系中未加入酶。TaqDNA 聚合酶因保存或運(yùn)輸不當(dāng)而失活，往往通過更換新酶或用另一來源的酶以獲得滿意的結(jié)果。
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2、模板含有雜質(zhì)。特別是對甲醛固定及石蠟包埋的組織常含甲酸，造成 DNA 脫嘌呤而影響 PCR 的結(jié)果。
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3、變性溫度是否準(zhǔn)確：PCR 儀指示溫度與實(shí)際溫度是否相符，過高酶在前幾個循環(huán)就迅速失活；過低則模板變性不徹底。
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4、反應(yīng)系統(tǒng)中污染了蛋白酶及核酸酶，應(yīng)在未加 Taq 酶以前，將反應(yīng)體系 95 ℃ 加熱 5~10 分鐘。
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5、引物變質(zhì)失效。人工合成的引物是否正確。是否純化，或因儲存條件不當(dāng)而失活。
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6、引物錯誤。利用 BLAST 檢查引物特異性或重新設(shè)計(jì)引物。
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7、DNA 凝膠電泳時加入陽性對照，確保不是 DNA 凝膠和 PCR 程序的問題。