實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
成纖維細胞是肺間質中含量豐富的細胞種類。這些成纖維細胞與普通的相似，但也有其的特征，例如具有很長的偽足和細胞間的間隙連接。
肺成纖維細胞的主要功能為分泌肺泡隔基質中的 III型膠原，彈性蛋白以及蛋白多糖，也在肺部受損時擔任重要的修復和重建功能。肺部受傷后，在炎癥部位的一定程度的成纖維細胞積聚是肺部復原的關鍵步驟，過多或者不足的成纖維細胞聚集都會導致肺功能異常。
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組織來源 |
產品規格 |
貨號 |
用途 |
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肺組織 |
5×105cells/T25細胞培養瓶 |
A01X2254 |
僅供科研研究實驗 |
細胞特性：
1）組織來源于實驗動物的正常肺組織。
2)細胞鑒定：纖維連接蛋白（Fibronectin）熒光染色為陽性。
3)經鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細胞生長方式：長梭狀細胞，貼壁培養。
推薦培養基
我們推薦使用 DELF 原代 成纖維 細胞培養體系 作為體外培養的培養基。
公司正在出售的產品：
FOXP3ELISAkit
胰島素樣生長因子酸不穩定亞基ALS抗體
IGFALS
牛病毒性腹瀉病毒1型E2蛋白抗體
BVDV E2
Tafazzin蛋白抗體 Anti-Tafazzin
受體活性修飾蛋白3抗體 Anti-RAMP3
腦特異性蛋白BPX抗體 Anti-NAP1L2
信號通路WNT8A抗體 Anti-Wnt8A
MFSD10蛋白抗體
MFSD10
唐氏綜合癥細胞粘附分子2抗體
DSCAML1
轉錄延伸因子B2抗體 Anti-Elongin B/TCEB2
神經元突觸膜胞外分泌調節蛋白3抗體 Anti-RIMS3
磷酸化2型神經纖維瘤抗體 Anti-Phospho-NF2(Ser518)
內脂素/內臟脂肪素抗體（N端） Anti-PBEF(NT)
TRAFD1蛋白抗體
TRAFD1
線粒體核糖體蛋白L52抗體
MRPL52
P物質受體抗體 Anti-Substance P Receptor/NK1R
嗅球蛋白3抗體 Anti-OLFM3/Optimedin
原鈣粘蛋白16抗體 Anti-PCDHB16
腫瘤壞死因子誘導蛋白8樣蛋白2/TNFα-IP 8L2抗體 Anti-TNFAIP8L2/TIPE2
羅丹明標記兔IgG（型對照)
豬肺成纖維細胞Mouse Anti-Rabbit IgG H&L / Cy7
FERDL3蛋白抗體
ankyrin repeat and MYND domain containing 1; Testis specific ankyrin like protein 1; TSAL1; Zinc finger MYND domain containing protein 13; ZMYND13; ANKY1_HUMAN.
豬肺成纖維細胞
大鼠肝內膽管上皮細胞
NB16人神經母細胞瘤細胞
人胰腺導管腺癌細胞；PL45 (STR)
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養基（含有1X雙抗）洗滌一次。經過的心臟破碎組織塊經過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養皿正置3-5小時，然后更換培養皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養皿在4℃正置過夜）；
（7）培養基培養：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養基，然后在恒溫潮濕細胞培養箱（37℃，5% CO2）培養48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據細胞數量種植到對應的培養皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術等。